生物化学实验

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作者：黄建华、袁道强、陈世峰 主编

出版日期：2009年3月 书号：978-7-122-04311-5

开本：16 装帧：平 版次：1版1次 页数：252页

本书共分三篇，分别是生物化学实验室规则及基本操作、基本生化实验技术、实验部分。在第二篇中，特别对基本生化实验技术理论进行了较详实的介绍，以期使用者能够掌握生化实验的背景和原理，在做实验的同时使自己的专业理论水平真正得到提高。

本书可作为高等院校动物科学、动物医学、食品科学、发酵工程、卫生检验、生物技术、化工、环保等专业的实验教材,也可供相关专业的学生、教师和科技工作者参考。

第一篇生物化学实验室规则及基本操作1

1实验室规则1

2预习报告要求1

3实验记录要求1

4实验报告书写要求及参考格式2

41实验报告的格式2

42实验报告的内容2

43实验结果3

5仪器的清洗与清洁3

51初用玻璃仪器的清洗3

52使用过的玻璃仪器的清洗3

53石英和玻璃比色皿的清洗3

54塑胶器皿的清洗3

55玻璃和塑胶器皿的乾燥4

6清洗液的配製及使用4

61铬酸洗液的配製4

62其他洗涤液4

7移液器的种类和使用4

71滴管4

72移液管(吸管)5

73微量进样器5

74自动取液器5

8定量容器的种类和使用6

81量筒、量杯6

82容量瓶7

9溶液的混匀7

91搅拌7

92旋转7

93弹打7

10实验室意外情况及处理措施8

101着火8

102爆炸8

103中毒9

104外伤9

105触电10

第二篇基本生化实验技术11

1分光光度技术11

11紫外和可见光光谱11

12萤光光度分析17

13原子吸收光谱18

2电泳技术19

21电泳技术总论19

22纸电泳和乙酸纤维薄膜电泳23

23聚丙烯醯胺凝胶电泳23

24琼脂糖凝胶电泳28

25免疫电泳29

26等电聚焦电泳30

27毛细管电泳31

28电泳结果处理34

3色谱技术36

31色谱技术概述36

32凝胶色谱42

33离子交换色谱50

34亲和色谱56

35具体的一些色谱方法62

36高效液相色谱66

4PCR技术70

41PCR基本原理70

42PCR的基本过程70

43PCR实验技术要点71

44提高PCR扩增特异性73

5膜分离技术74

51透析74

52超滤75

6免疫技术——酶联免疫吸附测定法(ELISA)76

61原理76

62操作要点76

7生物大分子製备技术81

71概述81

72生物大分子製备的前处理82

73生物大分子的分离纯化84

74样品的保存85

第三篇实验部分87

第一部分糖类实验87

实验一还原糖和总糖的测定(3,5二硝基水杨酸法)87

实验二可溶性总糖的蒽酮比色法测定88

实验三费林试剂法测定总糖89

实验四磷钼酸比色法测定血糖91

实验五黏多糖——肝素钠效价的测定93

实验六澱粉的提取及性质实验94

实验七澱粉与纤维素的测定95

实验八肝糖原的提取及鉴定97

实验九果胶的提取与胶冻的製备98

实验十可溶性糖的硅胶G薄层色谱99

实验十一糖的聚醯胺薄层色谱101

实验十二细菌细胞壁糖的薄层色谱102

实验十三葡萄糖1磷酸的製备及其纯度的测定104

第二部分脂类实验107

实验十四脂肪的硷水解及组分鉴定107

实验十五粗脂肪的定量测定——索氏抽提法108

实验十六皂化值的测定109

实验十七酸值的测定110

实验十八碘值的测定111

实验十九卵磷脂的提取及鉴定113

实验二十磷硫铁法测定血清胆固醇114

实验二十一分光光度法测定胆红素(改良JG法)115

实验二十二红细胞膜的製备及其成分分析(磷脂、胆固醇)116

第三部分胺基酸和蛋白质类实验120

实验二十三胺基酸的纸色谱120

实验二十四薄层色谱法分离胺基酸122

实验二十五甲醛滴定法测定胺基酸123

实验二十六华勃氏呼吸计法测定L谷氨酸124

实验二十七旋光法测定谷氨酸127

实验二十八蛋白质的沉澱反应、颜色反应、两性反应、电荷及等电点的测定128

实验二十九粗蛋白的定量测定——微量凯氏定氮法132

实验三十紫外光吸收法测定蛋白质含量135

实验三十一双缩脲法测定蛋白质含量137

实验三十二考马斯亮蓝G250法(Bradford法)测定蛋白质含量138

实验三十三Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质139

实验三十四尿素对蛋白质的变性作用141

实验三十五蛋白质DNS分析法(DNS—Cl膜色谱技术)142

实验三十六乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质144

实验三十七垂直板聚丙烯醯胺凝胶电泳分离蛋白质146

实验三十八等电聚焦电泳测定蛋白质等电点147

实验三十九SDSPAGE电泳测定蛋白质相对分子质量149

实验四十凝胶色谱法测定蛋白质相对分子质量151

实验四十一酪蛋白的提取152

实验四十二植物叶蛋白的提取153

实验四十三细胞色素C的製备及其测定155

第四部分核酸类实验158

实验四十四质粒DNA的硷裂解法提取与纯化158

实验四十五植物组织中核酸的提取和测定160

实验四十六酵母RNA的分离与组分鉴定162

实验四十七DNA的琼脂糖凝胶电泳163

实验四十八RNA的聚丙烯醯胺凝胶电泳165

实验四十九DNA重组167

实验五十PCR聚合酶扩增DNA168

实验五十一逆转录聚合酶(PCR)链反应169

第五部分酶类实验170

实验五十二过氧化氢酶和过氧化物酶的作用170

实验五十三温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液澱粉酶活性的影响172

实验五十四大麦萌发前后澱粉酶活力的比较174

实验五十五枯草桿菌蛋白酶活力的测定175

实验五十六转氨酶GPT、GOT活性的测定177

实验五十七脲酶的动力学研究178

实验五十八糖化型澱粉酶活力的测定183

实验五十九蛋清溶菌酶的製备及活力测定184

实验六十正交法测定对酶活力影响的几种因素185

实验六十一硷性磷酸酶的分离与纯化188

实验六十二结晶乳酸脱氢酶(LDH)的製备190

实验六十三琥珀酸脱氢酶的活性测定及丙二酸的抑制作用191

实验六十四辣根过氧化物酶的製备及酶比活力的测定192

实验六十五发色底物测定大曲中α葡萄糖苷酶活力195

实验六十六酵母蔗糖酶的纯化及性质研究197

实验六十七固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测201

实验六十八亲和色谱法纯化胰蛋白酶202

第六部分维生素类实验205

实验六十九维生素A的测定(三氯化锑比色法)205

实验七十还原型维生素C的测定206

实验七十一总维生素C的测定——2,4二硝基苯肼比色法207

实验七十二萤光法测定维生素B2(核黄素)209

实验七十三高效液相色谱法测定脂溶性维生素210

第七部分代谢类实验212

实验七十四肌糖原的酵解作用212

实验七十五发酵过程中无机磷的利用214

实验七十六糖酵解中间产物的鉴定215

实验七十七氨基转移反应的定性鉴定216

实验七十八脂肪酸的β氧化218

第八部分其他实验220

实验七十九辛酸硫酸铵法从人血清中纯化免疫球蛋白(IgG)220

实验八十免疫电泳技术221

实验八十一ELISA法测定单克隆抗体的效价222

实验八十二分光光度法测定叶绿素含量224

附录226

附录1一些常用化合物的溶解度(20℃)226

附录2酸、硷溶液的配製226

附录3常用酸硷体积分数、相对密度和物质的量浓度的关係226

附录4某些有机溶剂的主要物理常数228

附录5一些常用酸硷指示剂228

附录6混合指示剂229

附录7氧化还原染料229

附录8染料和萤光标準试剂229

附录9生物发色团230

附录10某些重要生化物质的摩尔消光係数230

附录11胺基酸的一些物理常数231

附录12元素的相对原子质量表232

附录13调整硫酸铵溶液饱和度计算表(25℃)233

附录14调整硫酸铵溶液饱和度计算表(0℃)233

附录15气体乾燥剂234

附录16液体乾燥剂234

附录17易变质及需要特殊方法保存的试剂234

附录18冷却剂234

附录19常用缓冲溶液的配製235

参考书目240